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化學發光試劑的發表

日期:2016-11-17瀏覽:920次

 化學發光試劑科學理論發展觀,核心講解.原理:辣根過氧化酶使試劑中的發光物(Luminol)氧化并發光,而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍。在免疫印跡中,將復雜的蛋白混合物經SDS-PAGE分離,并轉移到固相膜上(如NC、PVDF)等,用于免疫學檢測,經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接(標記一抗)或間接(標記二抗)反應。當加入免疫印跡化學發光試劑后,Luminol發生氧化降解,并發射波長為428nm的光,此光可經X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。
 化學發光試劑使用方法,印跡膜制備,按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作,適當的封閉非常重要??梢酝ㄟ^標記一抗或二抗的手段引入HRP,一般采用市售的HRP二抗交聯物。仔細地淋洗對于降低背景非常重要,在與HRP交聯物溫育后,膜片更需仔細洗滌,所有步驟均在室溫下完成。
 化學發光試劑的配置,在使用前等量混合A液和B液,混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。蛋白信號顯現,用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙以吸去過量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間,小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據信號的強弱適當調整曝光時間,一般為1min或5min,也可選擇不同時間多次壓片,以達*效果.創造奇跡,更好未來.

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