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化學發光試劑*技術

日期:2016-08-23瀏覽:985次

 技術,不一樣的神話.化學發光試劑,將印跡膜置于封閉液中,室溫輕輕震蕩20-60min,以封閉掉非特異性位點。
棄去封閉液,加入適量的一抗溶液,于搖床上輕輕震蕩1h。(也可將印跡膜與一抗在2-8°C條件下孵育過夜。)將印跡膜于洗脫液中懸浮清洗5min以上,并更換洗脫液4-6次。將印跡膜與適量的HRP-結合物置于搖床上輕輕震蕩,室溫孵育1h。重復步驟3以去除未結合的HRP-結合物.將A液和B液以1:1混合即得到超敏ECL化學發光工作液,推薦使用量為0.1mL/cm2。將工作液與印跡膜于室溫孵育5min。將膜從工作液中取出,并用吸水紙吸去多余的液體,置于兩層干凈的保鮮膜之間,小心擠出印跡膜與保鮮膜之間的氣泡。將印跡膜置于暗盒中,蛋白面朝上,于暗室中進行X-光膠片曝光。建議曝光時間為60s,進而通過調整曝光時間獲得較好的實驗結果。
  化學發光試劑,增強型化學發光底物能檢測抗體以及Western blot或ELISA標簽中的HRP活性。
經濟性與同類化學發光底物相比花費更少。pg級靈敏性,高靈敏性能快速檢測更廣泛的蛋白范圍。信號穩定.發光時間長,能進行多次曝光.信號強.發光信號比普通的以魯米諾為基礎的HRP檢測體系強兩倍以上.工作液穩定性高.工作液室溫穩定存放8小時;試劑盒能在室溫下保存一年。節約抗體,需要更少(稀釋更多)的一抗和二抗.校正曲線范圍廣.校正曲線的范圍從4.00–8000pg,R2為0.992。
   化學發光試劑注意事項.勿將超敏ECL化學發光工作液暴露在陽光或強光下,否則會導致其失活。建議將工作液保存在棕色瓶中,并避免長時間暴露在陽光下,實驗室光照對工作液影響不大。使用生物素/親和素體系時,避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素,容易產生非特異性信號。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態。使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。疊氮鈉是HRP酶的抑制劑,會對反應體系產生干擾,因此緩沖液中應避免使用疊氮鈉做為防腐劑。印跡膜與ECL化學發光工作液孵育后5-30min內的發出的熒光是zui強的,隨后熒光會隨著時間的延長減弱。蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間。更多相關知識,請咨詢本公司.

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